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免疫組化試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2021-04-22 點(diǎn)擊量:3135

免疫組化試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

 

保存方法:2-8℃保存。     有效期:一年。     生產(chǎn)日期:見(jiàn)封口。

 

工作原理:

辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位,具有較高活性及特異性,可溶性佳,生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散,可作用于多種底物,產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng),易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB H2O2存在的情況下,可以作為HRP的電子供體,產(chǎn)生褐色的不溶顆粒,可作為顯色的試劑。

試劑盒內(nèi)容:

 

名稱

規(guī)格

1

0.01mol/L pH6.0枸櫞酸鹽緩沖液

1L

2

PBS緩沖液

2L

3

廣譜二抗

3mL

4

30%H2O 2

10 mL

5

DAB顯色液I

0.6mL

6

DAB顯色液II

0.6mL

 

自備試劑:無(wú)水乙醇、蘇木素。

操作步驟

1. 60常規(guī)脫蠟至水,將石蠟切片先后浸入二甲,二甲10min。然后逐級(jí)降濃度酒精入水,每次3-5 min。

無(wú)水

35min

90% 酒精

35min

85% 酒精

35min

75% 酒精

35min

PBS洗滌3

每次5 min

2.熱修復(fù)抗原: 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液,微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 min后,反復(fù)1-2 次,置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH6.0PBS洗滌3次,每次5 min

3.消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:3% H 2 O 2 室溫孵育 5-10 min,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5 min;

4.滴加一抗: 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上,37孵育1小時(shí)左右或者4過(guò)夜, pH7.4PBS洗滌3次,每次5 min 。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)

5.加入廣譜二抗,37℃孵育1小時(shí),取出后PBS洗滌3次,每次5 min

6.DAB顯色: DAB顯色液III50微升加至1mL的水中,配成DAB工作液,滴加到切片,室溫顯色鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。

7..觀察顯色后自來(lái)水沖,蘇木精復(fù)染1-2min,,自來(lái)水沖10min,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片,干燥,分析拍照

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測(cè)

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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